辰麦检测技术中心生物TEM透射电镜超薄切片样品制备规程

2018-10-30 14:51 检测知识

  上海辰麦检测技术中心日常生物TEM透射电镜测试的一般步骤、方法和注意事项如下:

  1.取        材   根据实验目的取材,要求部位准确,体积小于1 mm3;

  2.醛类固定   用2%~3%的戊二醛固定8小时;

  3.清           用磷酸缓冲液清洗3次,每次10分钟;

  4.锇酸固定    用1%~2%的锇酸固定 2~3小时;

  5.清        洗    用磷酸缓冲液清洗3次,每次10分钟;

  6.脱           用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇梯度脱水各20分钟,100%乙醇脱水3~4次,每次30分钟;

  7.置        换    用环氧丙烷或丙酮置换3次,每次30分钟;

  8.浸           3(丙酮)︰1(包埋剂)浸渍1~2h;  1(丙酮)︰1(包埋剂)浸渍4~6h;  1(丙酮)︰3(包埋剂)浸渍12h或过夜; (体积比V/V);

  9.包        埋    第二天上午10点左右,把3:1浸渍好的样品直接放到加好纯包埋剂的包埋板里,包埋剂为Epon812;

  10.聚           放入35℃烘箱,3~4h后取出来,把样品定向、定位后再放回35℃烘箱。24h后,把烘箱温度调到40℃,聚合48h, 60℃聚合48h,聚合完成;

  11.修           将包埋头修成梯形,且样品表面积小于0.2mm×0.2mm;

  12.超薄切片   切片厚度50~90nm, 切片机:莱卡UC7;

  13.染        色    铀染色 5~15分钟 清 洗铅染色 5~10分钟 清 洗;

  14.拍           设备加速电压80kv.