以下是关于在日常在生物透射实验中关于生物样品取材固定运输的一些说明，供生准备做物透射电镜的各位研究人员参考！
1. 取材准备
1) 试剂 所需新鲜的2.5%戊二醛（用进口固定剂，国产效果一般，需要现配现用）、0.1M PH7.35 的磷酸盐缓冲液，注明配制日期及启用日期，置于4-6摄氏度冰箱预冷(2.5%戊二醛预冷至少 1 小时以上;磷酸盐缓冲液不宜长时间预冷，容易结晶)。
2) 仪器与器材 锋利刀片(手术刀片或飞鹰双面刀片)、镊子、低温操作台、1.5mlEP管、培养皿(或者硬纸卡，盛戊二醛用)、注射器(植物组织用)、冷冻离心机(细菌、细胞、藻类等需要离心的样品使用)。
2. 取材要求
1) 快
取材动作要迅速，材料离体后 1min 钟内必须进入戊二醛固定液，使组织、细胞尽可能保持原来生活状态，解剖器械要用锋利的刀片(新的手术刀片或飞鹰双面刀片)划切，避免牵拉或挤压，尽量减少取材中的机械损伤。(动物处死后 5min 内完成此步骤，时间越短越好!)
2) 准（取材要准确）
①器官要准确;
②部位要准确：如观察肾脏肾小球或脑神经元需取皮质而不要取髓质，
观察胰岛尽量取胰尾。
③胃肠道、皮肤、角膜、视网膜、耳蜗、骨骼肌等要注意方向性(横切或纵切)，取材成条状(0.5mm×1mm×3mm)，确保要观察的部位在较长的切面上。
3) 冷
取材过程应在 0~4 摄氏度的操作台上操作(或者是冰上操作，但要注意切勿使组织直接接触或贴近冰面，需要以操作面板隔离，以免操作时间过长而造成组织结冰出现冰晶损伤)，所有器械、容器、2.5%戊二醛、PBS 需 4℃预冷足够长的时间。
4) 小
不定位组织大小为 1mm×1mm×1mm(尽可能小，可以更小为 0.5mm×0.5mm×1mm，越薄越好)，如肝、肺、脾等不需要看特定结构的非定位器官组织;定位组织如神经、骨骼肌、肾、脑、肠、血管、胰岛等组织取材大小为 0.5mm×1mm×3mm的长条状(越薄越好)。
生物器官组织取材
1. 浸入固定 麻醉(1%戊巴比妥钠铵 5ml/kg 体重腹腔注射)或断头急性处死，解剖出所需器官，用解剖刀(锋利刀片)取一小块组织，立即(越快越好，1~3min 完成此操作)放入盛有预冷 2.5%戊二醛的培养皿(或硬纸片上)中，随后立即沿小块组织边缘(已经被固定)用锋利刀片取 1mm×1mm×1mm 或 0.5mm×1mm×3mm 大小组织置于盛有预冷 2.5%戊二醛 1.5mlEP 管中继续固定，4℃保存(请勿靠近冰箱边上造成标本冷冻结冰!!!)。
2. 灌注固定 脑组织等(初次取材者或未常规做灌注固定者此方法慎用，因在 TEM 结果出来前无法评价其固定是否成功)。
培养细胞取材
1. 贴壁细胞 培养好的细胞不经漂洗直接倒出培养液后迅速加足量预冷 2.5%戊二醛固定1h(戊二醛完全浸没细胞)，随后用细胞铲或细胞刮成 45°倾角快速铲下细胞(勿用胰蛋白酶消化)后全部转移到 15~50ml 离心管内，转速 500~800rpm 离心 5min 成团(细胞团大小约半个至一个绿豆大小为宜)，随后去除大部分上清液(留 1ml 左右，切勿丢失细胞)，将离心管里的细胞轻轻吹散后转移到 1.5ml 的 EP 管内，垂直静置自然沉降 1h 后轻轻吸去上清液(切勿丢失细胞)，再沿管壁缓缓加入 1ml 新预冷 2.5%戊二醛，随后置于 4℃冰箱固定保存。(此过程操作轻柔，切勿损伤细胞!)
2. 悬浮细胞 直接将细胞培养液全部转移到 15~50ml 离心管内，转速 500~800rpm 离心5min 成团(细胞团大小约半个至一个绿豆大小为宜)，随后去除大部分上清液(留 1ml 左右，切勿丢失细胞)，将离心管里的细胞轻轻吹散后转移到 1.5ml 的 EP 管内，垂直静置自然沉降 1h 后轻轻吸去上清液(切勿丢失细胞)，再沿管壁缓缓加入 1ml 新预冷 2.5%戊二醛，随后置于 4℃冰箱固定保存。(此过程操作轻柔，切勿损伤细胞!)
3. 细菌悬液(固体培养基自行转移成悬浮液) 直接将细菌悬液全部转移到 15~50ml 离心管内，转速800~1000rpm 离心 5min 成团(细胞团大小约半个至一个绿豆大小为宜)，随后去除大部分上清液(留 1ml 左右，切勿丢失细菌)，将离心管里的细菌轻轻吹散后转移到 1.5ml 的 EP 管内，垂直静置自然沉降 1h 后轻轻吸去上清液(切勿丢失细菌)，再沿管壁缓缓加入 1ml 新预冷 2.5%戊二醛，随后置于 4℃冰箱固定保存。(此过程操作轻柔，切勿损伤细菌!)
植物组织取材
植物取材较容易，取一小块植物组织浸入盛有预冷 2.5%戊二醛培养皿(或硬纸卡)上，随后用锋利刀片切成 0.5mm×0.5mm×3mm 小长条薄片，随后抽取气体。抽取气体 将植物组织同固定液一起倒入注射器，用乳胶手套食指堵住注射器出口，右手拉动针栓，将注射器口垂直向上，松开食指，右手轻推针栓使液面上的气泡从注射器口排出，反复多次，直至组织沉入固定液。
戊二醛固定液必须充满整个试管，不能留出较大气泡在里面，会导致部分组织暴露在固定液外面，影响测试结果。
透射电镜生物样品运输基本要求
用封口膜将 1.5mlEP 试剂管盖再次封好（务必认真操作，经常发生邮寄过程中固定液洒漏导致整个样品全废），做好标记，填好送样申请单(必须填，随样品寄出纸质版申请单)。随后用密封袋密封好插在海绵板或可以减震的塑料上，用废旧报纸包裹，放入 1~2 个冰袋，样品尽可能远离冰袋固定放置，或者用棉花将试管包裹起来，以防样品出现冰晶损伤,联系京东或顺丰等快递寄出。
实验案例欣赏
