生物样品常规超薄切片制备流程(一)细胞、细菌等样品：
1.固定
1)搜集样品，经缓冲液冲刷后，向样品中参加 2.5% 戊二醛缓冲固定液(电镜纯度)，4℃ 固定 2 小时以上;
2)缓冲液冲刷2到3次，每次5分钟;
3) 向样品中参加1%或2%四氧化锇缓冲固定液进行后固定, 室温或4℃固定1-3小时;
4)缓冲液冲刷2到3次，每次5分钟;
2. 脱水
用30%——50%——70%——90%——95%——100%酒精对样品进行梯度脱水, 每步5到10分钟;其间100%酒精需求重复2-3次，以确保脱水彻底;
3. 浸透
透射电镜
用无水环氧丙烷或丙酮置换样品中酒精，5-10分钟;然后进行环氧树脂浸透。(依选用的环氧树脂种类和配方，严厉按配方份额将树脂与固化剂等混兼并充沛拌和。)每步份额与时刻分别为：
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 3:1，1-3小时(室温)
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 1:1，1-3小时(室温)
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 1:3，3小时-过夜(室温)
环氧树脂： 12-24小时(室温)
4. 包埋与聚合
向环氧树脂中按1.5%-2%份额参加催化剂并混匀后注入包埋模具或胶囊中, 再将样品按所需的方位摆放在包埋模具或胶囊的树脂中，然后放入烘箱中聚合。主张先经35℃12小时，再经45℃12小时，然后60℃24小时聚合。
5.切片(略)
6.染色(略)
(二)植物安排(叶片、茎、根等)、真菌：
1.固定
1)收集样品，经缓冲液冲刷后，将样品放置入2.5% 戊二醛缓冲固定液(电镜纯度)中。植物安排需抽真空以使固定液充沛进入细胞(肉眼可见叶片等沉入固定液中)，4℃固定过夜;
2)缓冲液冲刷2到3次，每次5分钟;
3) 向样品中参加1%或2%四氧化锇缓冲固定液进行后固定, 室温或4℃固定3-4小时;
4)缓冲液冲刷2到3次，每次5分钟;
2. 脱水
用30%——50%——70%——90%——95%——100%酒精对样品进行梯度脱水, 每步20到30分钟;其间100%酒精需求重复2-3次，以确保脱水彻底;
3. 浸透
用无水环氧丙烷或丙酮置换酒精，20-30分钟;然后进行树脂浸透。(依选用的环氧树脂种类和配方，严厉按配方份额将树脂与固化剂等混兼并充沛拌和。)每步份额与时刻分别为：
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 3:1，3小时(室温)
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 1:1，3小时(室温)
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 1:3，3小时-过夜(室温)
纯环氧树脂： 24-72小时(室温)
以上各步都在旋转混合仪上进行摇晃旋转，以加快浸透。
4. 包埋与聚合
向纯环氧树脂中按1.5%-2%份额参加催化剂并混匀后注入包埋模具或胶囊中, 再将样品按所需的方位摆放在包埋模具或胶囊的树脂中，然后放入烘箱中聚合。主张先经35℃12小时，再经45℃12小时，然后60℃24小时聚合。(Spurr树脂需70℃24小时聚合)。
5.切片(略)
6.染色(略)
(三)活体动物安排：
1.固定
1)对小鼠脑、心脏等安排，用 2.5% 戊二醛和 4% 多聚甲醛混合缓冲固定液对试验动物进行灌流固定;对肝、肺等其他安排，可在腹腔中滴入上述混合固定液后选材;迅速取出试验安排，用手术剪或尖利的刀片快速切割为不大于1mm3的安排块，投入2.5% 戊二醛缓冲固定(电镜纯度)中，4℃或室温放置2小时以上;
2)缓冲液冲刷2到3次，每次5分钟;
3) 样品中投入1%或2%四氧化锇缓冲固定液中进行后固定, 室温或4℃固定1-3小时;
4)缓冲液冲刷2到3次，每次5分钟;
2. 脱水
用30%——50%——70%——90%——95%——100%酒精对样品进行梯度脱水, 每步5到10分钟;其间100%酒精需求重复2-3次，以确保脱水彻底;
3. 浸透
用无水环氧丙烷或丙酮置换酒精，5-10分钟;然后进行环氧树脂浸透。(依选用的环氧树脂种类和配方，严厉按配方份额将树脂与固化剂等混兼并充沛拌和。)每步份额与时刻分别为：
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 3:1，1-3小时(室温)
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 1:1，1-3小时(室温)
环氧丙烷(丙酮)：环氧树脂= 1:3，3小时-过夜(室温)
纯环氧树脂： 12-24小时(室温)
4. 包埋与聚合
向环氧树脂中按1.5%-2%份额参加催化剂并混匀后注入包埋模具或胶囊中, 再将样品按所需的方位摆放在包埋模具或胶囊的树脂中，然后放入烘箱中聚合。主张先经35℃12小时，再经45℃12小时，然后60℃24小时聚合。
5.切片(略)
6.染色(略)
